ⅠNukleinska kiselinaiuvod
Nukleinska kiselina je podijeljena na deoksiribonukleinsku kiselinu (DNK) i ribonukleinsku kiselinu (RNA), među kojima je RNK podijeljena na ribosomalnu RNK (rRNA), glasničku RNK (mRNA) i prijenosnu RNK (tRNA) prema različitim funkcijama.DNK je uglavnom koncentrisana u jezgru, mitohondrijima i hloroformu, dok je RNK uglavnom raspoređena u citoplazmi.Kao materijalna osnova ekspresije gena, ekstrakcija nukleinske kiseline igra izuzetno važnu ulogu u istraživanju molekularne biologije i kliničkoj molekularnoj dijagnostici.Koncentracija i čistoća ekstrakcije nukleinske kiseline direktno će uticati na kasniji PCR, sekvenciranje, konstrukciju vektora, digestiju enzima i druge eksperimente.
Ⅱ Metoda ekstrakcije i prečišćavanja nukleinske kiseline
① Metoda ekstrakcije fenolom/hloroformom
Ekstrakcija fenolom/kloroformom je klasična metoda za ekstrakciju DNK, koja uglavnom koristi dva različita organska rastvarača za tretiranje uzoraka, otapanje nukleinske kiseline zasnovane na DNK u vodenoj fazi, lipida u organskoj fazi i proteina između dvije faze.Ova metoda ima prednosti niske cijene, visoke čistoće i dobrog učinka.Nedostaci su kompliciran rad i dugo vrijeme.
② Trizol metoda
Trizol metoda je klasična metoda za ekstrakciju RNK.Trizol metoda se nakon centrifugiranja sa hloroformom deli na vodenu i organsku fazu, u kojoj se RNK otapa u vodenoj fazi, vodena faza se prenosi u novu EP epruvetu, dobija se taloženje nakon dodavanja izopropanola, a zatim prečišćavanje etanolom.Ova metoda je pogodna za ekstrakciju RNK iz životinjskih tkiva, ćelija i bakterija.
③ Metoda prečišćavanja centrifugalne kolone
Metoda pročišćavanja kolone centrifuge može adsorbirati DNK specifično kroz posebne adsorpcione materijale silikonske matrice, dok RNK i protein mogu proći glatko, a zatim koristiti visoku sol niski PH za kombiniranje nukleinske kiseline, eluciju niske soli visoke PH vrijednosti za odvajanje i pročišćavanje nukleinske kiseline.Prednosti su visoka koncentracija prečišćavanja, visoka stabilnost, nema potrebe za organskim rastvaračem i niska cijena.Nedostatak je što ga treba centrifugirati korak po korak, više radnih koraka.
④ Metoda magnetnih perli
Metoda magnetnih kuglica je da se uzorak ćelijskog tkiva podijeli kroz lizat, oslobodi nukleinsku kiselinu u uzorku, a zatim se molekule nukleinske kiseline specifično adsorbiraju na površini magnetne kuglice, dok nečistoće poput proteina i šećera ostaju u tečnost.Kroz korake cijepanja ćelijskog tkiva, vezivanja magnetnih kuglica sa nukleinskom kiselinom, ispiranja nukleinske kiseline, eluiranja nukleinske kiseline, itd., konačno se dobija čista nukleinska kiselina.Prednosti su jednostavno rukovanje i kratko vrijeme korištenja, bez potrebe postupnog centrifugiranja.Ima niske tehničke zahtjeve i može realizovati automatski i masovni rad.Specifična kombinacija magnetne kuglice i nukleinske kiseline čini ekstrahiranu nukleinsku kiselinu visoke koncentracije i čistoće.Nedostatak je što je trenutna tržišna cijena relativno skupa.
⑤ Druge metode
Pored navedene četiri metode, tu su i krekiranje ključanjem, metoda koncentrirane soli, metoda anjonskog deterdženta, ultrazvučna metoda i enzimska metoda itd.
Ⅲ Vrsta ekstrakcije nukleinske kiseline
Foregene ima vodeću svjetsku Direct PCR platformu, platformu za izolaciju RNK sa dvostrukom kolonom (samo DNK + samo RNA).Glavni proizvodi uključuju komplete za izolaciju DNK/RNA, PCR i Direct PCR reagense serije molekularnih laboratorijskih reagensa.
① Totalna ekstrakcija RNK
Uzorci ukupne RNA ekstrakcije uključuju krv, ćelije, životinjska tkiva, biljke, viruse, itd. Visoka čistoća i visoka koncentracija ukupne RNK može se dobiti ekstrakcijom ukupne RNK, koja se može koristiti u RT-PCR, analizi čipova, in vitro translaciji, molekularno kloniranje, Dot Blot i drugi eksperimenti.
Foregene povezanKompleti za izolaciju RNA
Komplet za izolaciju ukupne RNK životinja--Brzo i efikasno izdvajanje ukupne RNK visoke čistoće i visokog kvaliteta iz različitih životinjskih tkiva.
Komplet za izolaciju ukupne RNA ćelije--Visoko pročišćena i visokokvalitetna ukupna RNK može se dobiti iz različitih kultiviranih ćelija za 11 minuta.
Komplet za izolaciju ukupne RNK biljaka--Brzo ekstrahirajte visokokvalitetnu ukupnu RNK iz biljnih uzoraka s niskim sadržajem polisaharida i polifenola.
Komplet za izolaciju virusne RNK--Brzo izolujte i pročistite virusnu RNK iz uzoraka kao što su plazma, serum, tjelesne tečnosti bez ćelija i supernatanti ćelijske kulture.
② Ekstrakcija genomske DNK
Uzorci za ekstrakciju genomske DNK uključuju tlo, izmet, krv, ćelije, životinjska tkiva, biljke, viruse, itd. Ekstrakcija genomske DNK može se koristiti u enzimskoj digestiji, izgradnji DNK biblioteke, PCR-u, pripremi antitijela, Western blot hibridizacijskoj analizi, genskom čipu, visokom - sekvenciranje propusnosti i drugi eksperimenti.
Foregene povezanKompleti za izolaciju DNK
Komplet za izolaciju DNK životinjskog tkiva--Brza ekstrakcija i prečišćavanje genomske DNK iz više izvora, kao što su životinjska tkiva, ćelije, itd.
Blood DNK Midi komplet (1-5ml)--Brzo pročišćavanje visokokvalitetnog genomskog DNK iz antikoagulirane krvi (1-5ml).
Komplet za izolaciju DNK za bukalni bris/FTA karticu--Brzo očistite visokokvalitetni genomski DNK iz uzoraka bukalnog brisa/FTA kartice.
Komplet za izolaciju DNK biljaka--Brzo pročišćavanje i dobijanje visokokvalitetnog genomskog DNK iz biljnih uzoraka (uključujući polisaharide i uzorke polifenola)
③ Ekstrakcija plazmida
Plazmid je vrsta kružne male molekule DNK u ćelijama, koja je uobičajeni nosač za rekombinaciju DNK.Metoda ekstrakcije plazmida je uklanjanje RNK, odvajanje plazmida od bakterijske genomske DNK i uklanjanje proteina i drugih nečistoća kako bi se dobio relativno čist plazmid.
General Plasmid Mini Kit--Brzo očistite visokokvalitetnu plazmidnu DNK iz transformiranih bakterija za rutinske eksperimente molekularne biologije kao što su transformacija i probava enzima
④ Druge vrste ekstrakcije, ekstrakcija miRNA, itd.
Komplet za izolaciju miRNA životinja--Brzo i efikasno izdvajanje malih RNA fragmenata od 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA iz različitih životinjskih tkiva i ćelija
Ⅳ Zahtjevi za ekstrakciju nukleinske kiseline i rezultat prečišćavanjas
① Da bi se osigurao integritet primarne strukture nukleinske kiseline.
② Smanjite interferenciju proteina, šećera, lipida i drugih makromolekula
③ U uzorcima nukleinske kiseline ne bi trebalo postojati organski rastvarač ili visoka koncentracija metalnih jona koji mogu inhibirati enzim.
④ RNK i druge kontaminacije nukleinskim kiselinama treba eliminisati prilikom ekstrakcije DNK, i obrnuto.
Vrijeme objave: 24.11.2022
